■ Real Time PCR装置
使用美国ABI公司的STEPONE-PLUS (96孔)和ABI Vii7TM(384孔) Real-Time PCR SYSTEM，尽量减少您样品分析时的误差。
服务项目：
■ 定性分析
PCR反应结束后的PCR产物无需电泳检测，可以通过Real Time PCR方法，简单快速地对目的基因进行高特异性、高灵敏度的检测，同时闭管操作的实时检测可以有效防止反应产物的污染。本技术可以广泛应用于病毒、病原菌等致病微生物的检测以及各种生物品种的鉴定等。
■ 绝对定量
绝对定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品。使用已知浓度的标准品制作5个点以上的标准曲线后，可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量 (起始拷贝数)分析。
■ 相对定量 (mRNA表达量分析)
基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因同时分别进行定量，然后求出对于参比基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。参比基因通常选用表达量相对恒定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通过同时对参比基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。
检测方法：
■ 染料法（SYBR Green I）
SYBR Green I 是一种结合于小沟中的双链DNA 结合染料。与双链DNA 结合后，其荧光大大增强。
图1. SYBR GREEN I 工作原理
由熔解曲线来分析产物的均一性有助于分析由SYBR Green I 得到的定量结果。
图2：实时荧光定量PCR(SYBR Green I法)标准品扩增曲线
■ TaqMan 探针法
aqMan 探针是一种寡核苷酸探针，它的荧光与目的序列的扩增相关。它与目标序列上游引物和下游引物之间的序列配对。荧光基团连接在探针的5’ 末端，而淬灭剂则在3’ 末端。当完整的探针与目标序列配对时，荧光基团发射的荧光因与3’ 端的淬灭剂接近而被淬灭。但在进行延伸反应时，聚合酶的5’ 外切酶活性将探针进行酶切，使得荧光基团与淬灭剂分离。随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累。因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系。相对于染料法,Taqman探针法具有更高的特异性和准确性。
图3. Taqman 探针工作原理
操作程序：
■ 由您提供该实验中目的基因的相关资料（如：基因名称、序列等信息），我们共同探讨服务的可能性和技术路线；
■ 商定服务收费、付款方式、服务期限等，并签定技术服务合同。
■ 有您提供实验所需的足够量的实验样本（100mg组织或107个细胞），本公司不接受您提供的RNA样本
■ PCR所需引物/探针（如果用探针法），可以由您自己提供，也可以委托本公司设计合成（费用另计）。如果由您自己提供，必须是PAGE纯化的高质量的干粉，本公司不接受已溶解的引物/探针。
■ 我们进行RNA抽提、RNA定量、反转录、Real-time PCR扩增、数据分析。
■ 提供实验报告，包括实验过程、所用仪器试剂、扩增曲线、标准曲线和相关分析数据等。